徠卡顯微鏡解決色差,因為透鏡的焦距與透鏡區(qū)的規(guī)范化電位及線圈電流有關(guān)。當(dāng)電子柬本身的能量有離散或透鏡區(qū)靜電位有起伏時,都將導(dǎo)致規(guī)范化電位的改變。這種電位的變化,或者透鏡的激勵電流不穩(wěn).又都會引起焦距的變化。它們將使軸上物點(diǎn)受到不同的偏轉(zhuǎn),zui終與軸相交在不同處。在理想像平面中傷點(diǎn)與軸有了橫向偏離,從而形成模糊因斑。這種偏離稱為中心色差。像平面或物平面中的色差模糊圓半徑分別為:為減小色差,在設(shè)計透鏡時應(yīng)使c盡量小,因為色差系數(shù)c‘和極靴結(jié)構(gòu)及透鏡的激勵情況有關(guān)。
有聚光鏡的顯微鏡則可將聚光鏡作上下移動使其亮度適中,另外也可以改變可變光闡的孔徑以達(dá)到適中9b亮度。如果光線太陽時,則可將聚光鏡作適當(dāng)?shù)南蛏仙?,可變光鬧的孔徑作適當(dāng)?shù)姆糯?。如果光線太強(qiáng)則可將聚光鏡作適當(dāng)?shù)南陆?,可交光閏的孔徑作適當(dāng)?shù)臏p小。假如在這種情況下還感到刺眼,那末可選用適當(dāng)?shù)臑V光片放置在聚光鏡下的托架上。這柞就能獲得使你滿意的亮度。當(dāng)然在調(diào)節(jié)聚光鏡的上下位置利可變光閱的孔徑大小以及選用適合的濾光片,那是要經(jīng)過一定時期的實踐而取得經(jīng)驗的。
徠卡顯微鏡一個非常重要的問題是在取材和分離細(xì)胞過程,冰凍干燥和樹脂包埋(FD)后冰凍超簿團(tuán)片后,冰凍干燥后細(xì)跑各部位65元素成分含量中必須處理十分仔細(xì),絕不能損傷待觀察分析的細(xì)胞。因為作x線微區(qū)分析不但步驟繁多,而且成本甚高,如果經(jīng)過長時間及多步驟的處理后,所分析的細(xì)胞是受損傷的細(xì)胞或死細(xì)胞,得出錯誤的結(jié)論是非常遺憾的。如經(jīng)過膠元酶處理分離出的心肌細(xì)胞有兩種形態(tài),一種是長桿狀,另一種是圓形。后者是在細(xì)胞分離過程中受損傷的瀕死細(xì)胞。
可將肌纖維放在一特制的架上,使該肌纖維收縮達(dá)到某時相需要固定時,立即啟動噴咀,使液態(tài)丙烷向肌纖維噴射,使之淬冷固定。然后再將肌纖維連同架子取出投入液氮中。如果固定血細(xì)胞或分離的細(xì)胞,首先低速離心使細(xì)胞集中,將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到一個導(dǎo)熱性能良好的銀質(zhì)小管中、將該小管放入液態(tài)丙烷中獰冷固定。實驗室固定大鼠胰腺時,先將兩鋼塊用液氦(或液氮)預(yù)冷,用鉗夾住兩銅塊將其放在胰腺前后,使姨腺淬冷固定。組織或細(xì)胞淬冷固定后轉(zhuǎn)移到液氮中可長期保存。
除目前zui推崇的冰凍超薄切片法外,在這里再介紹一種科學(xué)家們用過的沉積技術(shù)。在進(jìn)行分析前加入一種物質(zhì),使之與待分析的成份形成沉積物以固定它,然后分析該沉積物。例如,人們常用草酸鹽與焦銻酸鹽去沉積肌細(xì)胞中的ca。前者對胞漿中低濃度的ca敏感性不夠高;焦銻吱鹽的敏感性高些,可與腦漿中游離ca形成電子致密的沉積物,但焦銻酸鹽與鈉、錳、鋇、鐵也形成沉積物,特異性較差。標(biāo)本制備過程類似于普通透射電鏡超薄切片標(biāo)本的制備,不同之處在于固定前3%焦銻酸鉀固定6小時,在染色的肌肉超薄切片上,在每個肌節(jié)的A帶和2帶的中線可見黑色沉淀物、再用未染色的切片做X射線微區(qū)分析。曾用二氨基聯(lián)苯胺四鹽酸(DAB)去沉淀含血紅素的物質(zhì)等等。這種組化的沉淀反應(yīng)與x射線微區(qū)分橋聯(lián)合應(yīng)用在不具備冰凍超薄切片條件的實驗室可考慮采用。根據(jù)待分析元素的峰高可做半定量。